超凈工作臺(tái)在沉降菌測(cè)試中的應(yīng)用
目的：建立潔凈室（區(qū)）中沉降菌的測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，保證藥品在規(guī)定潔凈級(jí)別的區(qū)域內(nèi)進(jìn)行生產(chǎn)。
范圍：適用于潔凈室（區(qū)）的沉降菌的測(cè)試。
職責(zé)：質(zhì)量管理部、QA檢測(cè)員
內(nèi)容：
1、測(cè)試方法
本測(cè)試方法采用沉降法，即通過自然沉降原理收集空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時(shí)間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評(píng)定潔凈室(區(qū))的潔凈度。
2、儀器、設(shè)備、培養(yǎng)基
2.1培養(yǎng)皿：Φ90mm×15mm?培養(yǎng)皿
2.2培養(yǎng)基：營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基
2.3生化培養(yǎng)箱：必須定期對(duì)生化培養(yǎng)箱進(jìn)行校驗(yàn)。
2.4自動(dòng)臺(tái)式滅菌器：使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照儀器說明書操作。
3、測(cè)試條件
3.1溫度和相對(duì)濕度：潔凈室（區(qū)）的溫度和相對(duì)濕度應(yīng)與其生產(chǎn)及工藝要求相適應(yīng)，溫度控制在18℃～26℃，相對(duì)濕度控制在45%～65%為宜。
3.2壓差：空氣潔凈度不同的潔凈室（區(qū)）之間壓差應(yīng)≥10Pa。
4、測(cè)試狀態(tài)：動(dòng)態(tài)測(cè)試和靜態(tài)測(cè)試。靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室內(nèi)測(cè)試人員不得多于2人；動(dòng)態(tài)測(cè)試時(shí)，現(xiàn)場(chǎng)人員數(shù)按《潔凈區(qū)人員控制管理制度》中規(guī)定執(zhí)行，記錄中注明現(xiàn)場(chǎng)人員數(shù)量及測(cè)試點(diǎn)位置。
5、測(cè)試時(shí)間：對(duì)單向流，測(cè)試應(yīng)在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)運(yùn)行不少于10分鐘后開始；對(duì)非單向流，測(cè)試應(yīng)在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)運(yùn)行不少于30分鐘后開始。
6、采樣點(diǎn)數(shù)量及布置
6.1最少采樣點(diǎn)數(shù)目
|
房間面積（m） |
潔凈度級(jí)別 |
||
|
100 |
10000 |
100000 |
|
|
＜10 |
2—3 |
2 |
2 |
|
≥10—＜20 |
4 |
2 |
2 |
|
≥20—＜40 |
8 |
2 |
2 |
|
≥40—＜100 |
16 |
4 |
2 |
|
≥100—＜200 |
40 |
10 |
3 |
|
≥200—＜400 |
80 |
20 |
6 |
|
≥400—＜1000 |
160 |
40 |
13 |
|
≥1000—＜2000 |
400 |
100 |
32 |
|
≥2000 |
800 |
200 |
63 |
6.2最少培養(yǎng)皿數(shù)
在滿足最少測(cè)點(diǎn)數(shù)的同時(shí)，還宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)，見下表
|
潔凈度級(jí)別 |
所需Φ90mm培養(yǎng)皿數(shù)(以沉降0.5 h /靜態(tài)或4h /動(dòng)態(tài)計(jì)) |
|
100 |
14 |
|
10000 |
2 |
|
100000 |
2 |
6.3采樣點(diǎn)布置類型
超凈工作臺(tái)的采樣點(diǎn)” />
6.4采樣點(diǎn)的位置
6.4.1一般布置在離地面0.8-1.5m之間或操作平臺(tái)的高度，除受潔凈室（區(qū)）的設(shè)備限制外，應(yīng)在整個(gè)潔凈室（區(qū)）均勻布置。
6.4.2每個(gè)采樣點(diǎn)一般采樣一次，也可以多于1次。
6.4.3布置采樣點(diǎn)時(shí)，應(yīng)避開回風(fēng)口，測(cè)試人員應(yīng)在采樣口的下風(fēng)側(cè)。
7、培養(yǎng)基制備
7.1依據(jù)檢測(cè)區(qū)域的取樣點(diǎn)數(shù)，按照《培養(yǎng)基配制標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》制備適量的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。
7.2在超凈工作臺(tái)內(nèi)，以無菌操作法將配制好的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基以每皿約15ml的裝量分裝，待培養(yǎng)基凝固后移出潔凈區(qū)。
7.3將制備的營(yíng)養(yǎng)瓊脂平皿倒置于生化培養(yǎng)箱內(nèi)35℃培養(yǎng)48小時(shí)，確認(rèn)無菌落數(shù)后使用。
7.4培養(yǎng)皿傳進(jìn)潔凈室（區(qū)）測(cè)試前要進(jìn)行表面消毒。
8、測(cè)試
8.1將已制備好的培養(yǎng)皿按采樣點(diǎn)布置圖逐個(gè)放置，然后從里到外逐個(gè)打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露在空氣中。
8.2靜態(tài)測(cè)試時(shí)，培養(yǎng)皿暴露時(shí)間為30min，動(dòng)態(tài)測(cè)試時(shí)，培養(yǎng)皿暴露時(shí)間為不大于4h。
9、培養(yǎng)：取樣結(jié)束后將平皿倒置于生化培養(yǎng)箱內(nèi)35℃培養(yǎng)72小時(shí)，并以未采樣的營(yíng)養(yǎng)瓊脂平皿作對(duì)照皿。
10、結(jié)果計(jì)算
10.1?用計(jì)數(shù)方法得出各個(gè)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。
10.1.1用肉眼對(duì)培養(yǎng)皿上所有的菌落直接計(jì)數(shù)、標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)，然后用5～10倍放大鏡檢查，有否遺漏。
10.1.2?培養(yǎng)皿上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。
10.2?每個(gè)測(cè)點(diǎn)的沉降菌平均菌落數(shù)的計(jì)算:
=?
式中：????—平均菌落數(shù)
M1—1號(hào)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)
M2—2號(hào)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)
Mn—n號(hào)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)
n—培養(yǎng)皿的總數(shù)
11、結(jié)果評(píng)定
11.1?每個(gè)測(cè)點(diǎn)的沉降菌的平均菌落數(shù)必須低于所規(guī)定評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)的界限。
11.2?在靜態(tài)測(cè)試時(shí)，若某測(cè)點(diǎn)的沉降菌平均菌落數(shù)超過評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，則應(yīng)重新采樣兩次，兩次測(cè)試結(jié)果均合格才能判為符合。
11.3若測(cè)試結(jié)果超標(biāo)時(shí)應(yīng)及時(shí)與生產(chǎn)部門聯(lián)系，對(duì)該區(qū)域進(jìn)行消毒或其它處理，然后重新測(cè)試至合格。
11.4潔凈區(qū)沉降菌控制標(biāo)準(zhǔn)
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潔凈度級(jí)別 |
A |
B |
C |
D |
|
|
沉降菌cfu/4小時(shí) |
標(biāo)準(zhǔn) |
＜1 |
5 |
50 |
100 |
|
警戒限 |
— |
3 |
40 |
80 |
|
|
糾偏限 |
— |
4 |
45 |
90 |
|
| 1、表中數(shù)值均為平均值。
2、單個(gè)沉降碟的暴露時(shí)間可以少于4小時(shí)，同一位置可使用多個(gè)沉降碟連續(xù)進(jìn)行檢測(cè)并積累計(jì)數(shù)。 |
|||||
12、注意事項(xiàng)
12.1采樣前應(yīng)仔細(xì)檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。
12.2應(yīng)采取一切措施防止采樣過程的污染和其他可能對(duì)樣本的污染。
12.3測(cè)試用具要作滅菌處理，以確保測(cè)試的可靠性、正確性。
13、檢測(cè)頻率：1次/3個(gè)月。
14、附錄
附錄《沉降菌測(cè)試記錄》
15、歷史修訂記錄和原因
|
版本號(hào) |
修訂原因 |
修訂日期 |
|
01 |
?????????新訂 |
附錄
???????????????????沉降菌測(cè)試記錄
編碼：SOP-ZL-HJ-006-01-R1
|
測(cè)試區(qū)域 |
|
|||||||||||||
|
測(cè)試依據(jù) |
|
測(cè)試人員 |
|
|||||||||||
|
測(cè)試日期 |
|
培養(yǎng)基用量 |
|
|||||||||||
|
測(cè)試狀態(tài) |
|
培養(yǎng)時(shí)間 |
|
|||||||||||
|
培養(yǎng)溫度 |
|
報(bào)告日期 |
|
|||||||||||
|
測(cè)試房間 |
房間編號(hào) |
現(xiàn)場(chǎng)操作人員數(shù) |
采樣點(diǎn)布置類型 |
沉降菌菌落數(shù)/cfu |
符合規(guī)定 |
|||||||||
|
a |
b |
測(cè)點(diǎn)1 |
測(cè)點(diǎn)2 |
測(cè)點(diǎn)3 |
測(cè)點(diǎn)4 |
|||||||||
| 更鞋間 |
PLES123 |
|
|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 男一更 |
PLES124 |
|
|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 女一更 |
PLES125 |
|
|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 男二更 |
PLES126 |
|
|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 女二更 |
PLES127 |
|
|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 手消毒間 |
PLES128 |
|
|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 外用酊劑線 |
PLES129 |
|
|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 酊劑配制間 |
PLES130 |
|
|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 酊劑灌裝間 |
PLES131 |
|
|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 預(yù)留間1 |
PLES132 |
|
|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 溶液劑灌裝間 |
PLES133 |
|
|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 理瓶、洗瓶間 |
PLES138 |
|
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|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 瓶子暫存間 |
PLES139 |
|
|
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|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 洗衣整衣間 |
PLES140 |
|
|
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|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 消毒液配制間 |
PLES141 |
|
|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 不合格品存放 |
PLES142 |
|
|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 潔具存放間 |
PLES143 |
|
|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 模具存放間 |
PLES144 |
|
|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 容器存放 |
PLES145 |
|
|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 容器洗滌 |
PLES146 |
|
|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 內(nèi)包材存放間 |
PLES147 |
|
|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 溶液劑配制間 |
PLES148 |
|
|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 半固體配制間 |
PLES149 |
|
|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 廢棄間 |
PLES150 |
|
|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 中檢室 |
PLES151 |
|
|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 中間站 |
PLES152 |
|
|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 稱量間、（前室） |
PLES153 |
|
|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 稱量、配料間 |
PLES154 |
|
|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 粉碎、過篩間 |
PLES155 |
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|
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|
|
是□??否□ |
|||||
| 半固體灌裝間 |
PLES156 |
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|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 原輔料暫存間 |
PLES157 |
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|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 緩沖室 |
PLES158 |
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|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
| 走廊 |
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||||||
|
陰性對(duì)照 |
|
是□??否□ |
||||||||||||
|
潔凈度級(jí)別 |
A |
B |
C |
D |
||||||||||
|
沉降菌 cfu/4小時(shí) |
標(biāo)準(zhǔn) |
＜1 |
5 |
50 |
100 |
|||||||||
|
警戒限 |
— |
3 |
40 |
80 |
||||||||||
|
糾偏限 |
— |
4 |
45 |
90 |
||||||||||
|
備注 |
|
|||||||||||||
?沉降菌測(cè)試記錄
?????????????????????????????????????????????編碼：SOP-ZL-HJ-006-01-R1
|
測(cè)試區(qū)域 |
|
|||||||||||||
|
測(cè)試依據(jù) |
|
測(cè)試人員 |
|
|||||||||||
|
測(cè)試日期 |
|
培養(yǎng)基用量 |
|
|||||||||||
|
測(cè)試狀態(tài) |
|
培養(yǎng)時(shí)間 |
|
|||||||||||
|
培養(yǎng)溫度 |
|
報(bào)告日期 |
|
|||||||||||
|
測(cè)試房間 |
房間編號(hào) |
現(xiàn)場(chǎng)操作人員數(shù) |
采樣點(diǎn)布置類型 |
沉降菌菌落數(shù)/cfu |
符合規(guī)定 |
|||||||||
|
a |
b |
測(cè)點(diǎn)1 |
測(cè)點(diǎn)2 |
測(cè)點(diǎn)3 |
測(cè)點(diǎn)4 |
|||||||||
|
一更 |
PLEZ120 |
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|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
|
二更1 |
PLEZ121 |
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|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
|
二更2 |
PLEZ122 |
|
|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
|
緩沖間1 |
PLEZ123 |
|
|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
|
緩沖間2 |
PLEZ124 |
|
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|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
|
微生物限度室 |
PLEZ125 |
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|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
|
凈化操作臺(tái) |
PLEZ125 |
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|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
|
陽(yáng)性對(duì)照室 |
PLEZ126 |
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|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
|
凈化操作臺(tái) |
PLEZ126 |
|
|
|
|
|
|
|
是□??否□ |
|||||
|
陰性對(duì)照 |
|
是□??否□ |
||||||||||||
|
潔凈度級(jí)別 |
A |
B |
C |
D |
||||||||||
|
沉降菌 cfu/4小時(shí) |
標(biāo)準(zhǔn) |
＜1 |
5 |
50 |
100 |
|||||||||
|
警戒限 |
— |
3 |
40 |
80 |
||||||||||
|
糾偏限 |
— |
4 |
45 |
90 |
||||||||||
|
備注 |
|
|||||||||||||
?
?沉降菌測(cè)試記錄
?
?????????????????????????????????????????????編碼：SOP-ZL-HJ-006-01-R1
|
測(cè)試區(qū)域 |
|
|||||||||||||
|
測(cè)試依據(jù) |
|
測(cè)試人員 |
|
|||||||||||
|
測(cè)試日期 |
|
培養(yǎng)基用量 |
|
|||||||||||
|
測(cè)試狀態(tài) |
|
培養(yǎng)時(shí)間 |
|
|||||||||||
|
培養(yǎng)溫度 |
|
報(bào)告日期 |
|
|||||||||||
|
測(cè)試房間 |
房間編號(hào) |
現(xiàn)場(chǎng)操作人員數(shù) |
采樣點(diǎn)布置類型 |
沉降菌菌落數(shù)/cfu |
符合規(guī)定 |
|||||||||
|
a |
b |
測(cè)點(diǎn)1 |
測(cè)點(diǎn)2 |
測(cè)點(diǎn)3 |
測(cè)點(diǎn)4 |
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|
更衣 |
PLEQ003 |
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是□??否□ |
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緩沖間1 |
PLEQ004 |
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是□??否□ |
|||||
|
取樣間 |
PLEQ005 |
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是□??否□ |
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|
緩沖間2 |
PLEQ006 |
|
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|
|
是□??否□ |
|||||
|
陰性對(duì)照 |
|
是□??否□ |
||||||||||||
|
潔凈度級(jí)別 |
A |
B |
C |
D |
||||||||||
|
沉降菌 cfu/4小時(shí) |
標(biāo)準(zhǔn) |
＜1 |
5 |
50 |
100 |
|||||||||
|
警戒限 |
— |
3 |
40 |
80 |
||||||||||
|
糾偏限 |
— |
4 |
45 |
90 |
||||||||||
|
備注 |
|
|||||||||||||